Cultivo In Vitro: Generalidades.
El cultivo in vitro es un
método muy utilizado en biotecnología vegetal que permite la producción de
plantas, proporcionando las condiciones óptimas para su desarrollo. Esta
producción de plantas se puede realizar a partir de semillas (germinación in
vitro), partes de la planta como por ejemplo trozos de tallos con yemas
axilares, fragmentos de hoja o cotiledones (morfogénesis directa), inducción de
callo en trozos de hoja o en raíces (morfogénesis indirecta) o bien otras
partes de la planta como anteras, etc. En este proceso es necesario mantener
unas condiciones de esterilidad para evitar la contaminación del medio de
cultivo por los microorganismos presentes en el ambiente.
Para realizar un
cultivo in vitro es necesario
seleccionar el material vegetal a utilizar y que se debe esterilizar, ya que en
todo el proceso es necesario mantener unas condiciones de asepsia y
esterilidad. Antes de esto, se debe preparar el medio de cultivo, que también
debe estar esterilizado. Los medios de cultivo son una parte muy importante en
el cultivo in vitro, ya que son
necesarios para el crecimiento y desarrollo.
Podemos definir "medio de
cultivo" como una solución donde están disueltos los macronutrientes (N, P, K, S. Ca y Mg) y los micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y
Co) necesarios para ese crecimiento y
desarrollo, que además se puede complementar con otros compuestos como sacarosa
(fuente de carbono), aminoácidos, vitaminas y hormonas (reguladores del crecimiento
como auxinas, citoquininas).
El medio de cultivo puede ser líquido (condiciones
hidropónicas) o sólido (lleva una parte de agar para gelificar). Aunque existen
varios medios de cultivo (SH, Shenk y Hildebrandt 1972; B5, Gamborg, Miller y Ojima
1968; White 1963), el más utilizado es el
de Murashige
& Skoog 1962 (MS), que se puede comprar ya hecho.
Es necesario ajustar el pH del medio hasta 5,7. Si el medio es sólido
se añaden unos 7,5 g de agar. El medio se esteriliza en el autoclave y se
reparte en los recipientes que se utilizarán para el cultivo in vitro (placas
petri, tubos de ensayo grandes, botes de vidrio, etc.).
Protocolo resumido para el cultivo in
vitro:
· El material vegetal se
debe esterilizar antes del cultivo. Se puede esterilizar el material en un
recipiente estéril con lejía al 20% durante 10-15 minutos.
· Pasado este tiempo, se
lava el material vegetal con agua estéril y se realiza el cultivo, todo en
condiciones de asepsia y esterilidad en campana de flujo de aire laminar para
evitar la contaminación.
· Posteriormente se
introducen los cultivos en cámaras de cultivo con el fotoperiodo y la humedad
relativa adecuada (≈ 25 ºC, 16 h luz).
· Cuando las plantulitas
han crecido lo suficiente se realiza un trasplante a otro recipiente con
sustrato húmedo (vermiculita-turba, 1:1), este proceso se denomina Aclimatación.
Este paso puede llevar otro previo en el que las plántulas ya trasplantadas
pueden continuar un periodo de tiempo adicional en la cámara de cultivo.
Cultivo in vitro en casa:
Desde hace unos años, algunas empresas especializadas se han centrado en la creación y comercialización de kits que imitan estas técnicas de biotecnología pero de una manera más sencilla, inocua y entretenida. Se tratan de kits que simplifican los pasos a seguir para la obtención de plantas desde la germinación de la semilla en un medio gelificado hasta la aclimatación de la planta en discos de turba hidratados, en un formato atractivo y divertido.
